qpcr和rtpcr的区别_rt-pcr与qpcr的区别

rtpcr结果天第三天怎么分析

4. 溶解曲线：表示随温度升高 DNA 的双螺旋结构降解程度的曲线。

rtpcr结果天第三天怎么分析方法如下1. 首先设置好内参和对照组（在 Analysis Settings 处），一般我们在上机前会对应设置好的，如果设置好的话可以直接跳至第 3 点。

qpcr和rtpcr的区别_rt-pcr与qpcr的区别

qpcr和rtpcr的区别_rt-pcr与qpcr的区别

qpcr和rtpcr的区别_rt-pcr与qpcr的区别

RT-PCR有两种解释： 1，最常用的理解：RT 是‘逆转录’（rrse transcription）的缩写 2，现在也有人这么用：RT是‘实时’（real time）的缩写 1，先说逆转录PCR： 这项技术使用的‘逆转录酶’来自逆转录，是一种能按照碱基互补配对原则，以脱氧核糖核苷酸为底物，以寡居dT为引物，把mRNA转换成相应DNA的酶，由于该酶的效果与中心法则（DNA所承载的生物信息表达顺序应该是DNA-RNA-蛋白）顺序相反，故而有'逆转录'之称。 由于逆转录反应使用了引物和模板，也是聚合酶链式扩增的（PCR是‘链式扩增反应’polymerase chain reaction 的缩写）故称为RT-PCR。 再说其用途： 我们提取的RNA主要是rRNA，即核糖体RNA，但很少有人用它做些什么，倒是含量较少的mRNA，即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站，所以我们要把微量的信使RNA搞出来，更重要的是，RNA太容易分解了，环境中无处不在的RNA酶啊，以及其容易被水解的特点啊，让你不得不尽快把珍贵的信使RNA转化成稳定的形式，于是就有了RT-PCR。 2， 再说实时PCR 细胞瞬时转录的mRNA种类颇多，各种mRNA含量也有实时的改变，这反映了细胞核内转录因子根据环境要求在做出相应的变化，realtime-PCR，以及quantitative realtime-PCR （简称qRT-PCR）就应运而生。 原理：利用PCR高度的特异性，通过特定的引物能在复杂样品中得到的特定序列的DNA，而这种特定DNA的产量跟反应初始阶段模板量是直接相关的。简单说来。经过一个PCR循环，可以把一个模板变成两个，在经过一个循环，就会变成四个，以此类推。如果PCR的检测线是1000个产物，那么当你的初始样品中模板是n个，那就需要经历的循环数为 的时候才能检测，这就把循环数与初始样品中模板数联系起来了。也就是说经过计算，达到检测限的循环数就能反映初始RNA样品中某种RNA的含量多少。 在实际中，使用了特殊的含有荧光剂的引物，光学检测相应光强度的产物所需的循环数，能高度灵敏的达到目的。 realtime-PCR有两种。定量和相对定量。 定量常用于逆转录侵染细胞的检测，比如你想知道有多少HIV侵染了样本中的T细胞，你可以收集一定数量的T细胞并提取RNA，通过逆转录，以及taq酶利用HIV的特异引物进行扩增，最终的循环数可以反应你的这群T细胞正在被多少个HIV侵染。 相对定量常用于检测实时的转录谱，例如在给前后，某重要基因转录的实时变化，可以分别收取给前后的全RNA，用相对转录量不变的基因为内参，如GAPDH或beta-actin，与目标基因转录的转录量对比，来定量反应物对目的基因转录含量的影响。一气呵成，难免有错，看着玩吧

2. 点击进去后，选择对应好的内参和对照组。

5. 如果前面的几项都没有太大的问题的话。我们看看最重要的结果，也就是目的基因的变化情况了。

rtpcr结果天第三天怎么分析方法如下1. 首先设置好内参和对照组（在 Analysis Settings 处），一般我们在上机前会对应设置好的，如果设置好的话可以直接跳至第 3 点。

2. 点击进去后，选择对应好的内参和对照组。

5. 如果前面的几项都没有太大的问题的话。我们看看最重要的结果，也就是目的基因的变化情况了。

rtpcr结果天第三天怎么分析方法如下1. 首先设置好内参和对照组（在 Analysis Settings 处），一般我们在上机前会对应设置好的，如果设置好的话可以直接跳至第 3 点。

2. 点击进去后，选择对应好的内参和对照组。

5. 如果前面的几项都没有太大的问题的话。我们看看最重要的结果，也就是目的基因的变化情况了。

1. 首先设置好内参和对照组「在 Analysis Settings 处」，一般我们在上机前会对应设置好的，如果设置好的话可以直接跳至第 3 点。如果没有设置好的话是需要重新进行设置。

2. 点击进去后，选择对应好的内参和对照组。「在 Relative Quantization Settings 选项下」

3.选择好内参和对照组后，我们首先看看 PCR 跑的有没有问题，在这里大家Z常会见到的问题是在样品池出现了三角形符号，如下图：

rtpcr结果天第三天怎么分析方法如下

点击进去后,选择对应好的内参和对照组。

模板的定量比较麻烦3.

1. 打开存取的数据文件,点击

2. 依次点击 , , 这就 是适 合 SYBR green 为 染料 的选项。 点击 step1:Baseline 下的“change graph settings”小图标 。取消

3. 点击 下的“ change graph settings ”小图标 RTPCR

rt pcr 要求个分组的RNA模板量一样吗？

选择好内参和对照组后,我们首先看看 PCR 跑的有没有问题。

模板的多少首先就会影响到整个反应,有时过多的话甚至不能扩增

rtpcr检测即逆转录-聚合酶链反应。

一般情况3．选择好内参和对照组后，我们首先看看 PCR 跑的有没有问题。下,只要不影响到整个PCR体系,模板的多少对结果影响很小.

我试过同一组反应体系加1微升和0.4微升P到的目的条带亮度相当

当然,上述只为本人经验啊...呵呵,不知道对你有没有用

反转试剂盒对于处理初始RNA样品的量有说明，你只要把用来做反转录的其实RNA量控制在那个范围以内就好了。

至于上荧光定量PCR仪就没有关系了，你有内参作为校准，得到的都是相对值，你是用相对值来进行比较。

当然啦，控制变量嘛！

应用RT-PCR研究外源基因转录表达的优缺点

1、的基因为你目的条带的多少可能不是基因本身的表达量的问题，而是模版DNA的量的多少造成的，所以为了排除这个可能性以及误，就要用到内参基因来表示全部DNA的量。因此，在计算时，目的基因除以内参基因就能得到目的基因的相对表达量了。础研究：基因组克隆

提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。

再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。

RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个理论上一个分子的RNA也能扩增到目的条带的数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。

该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。

rtPCR的作用

2.

即反转录酶聚合酶链式反应主要用于以高精度、高效率的大量样品DNA。主要用于与分子生物，医我在国外学生物， 你这个Q 是 quantity 的意思吗？ 是不是和 real time PCR 一个意思?学方面的DNA鉴定。

RT-PCR过程影响因素TA说

跑RT-PCR的时候显示选择了2个内参，但是结果不是很理想，我又加了两个，结果发现得出完全不一样的结论，

RT—PCR（Rrse Transcription-Polymerase Chain Reaction）是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用，从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，在DNA聚合酶作用下扩增合成目的片段。RT—PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。BIOG RNA保护剂可有效阻止RNase活性来保护RNA不被降解；保存在RNA保护剂中的RNA样本在-20℃条件可保存六个月，并且加入保护剂的RNA可直接做下游实验，无任何影响。BIOG Super cDNA Synthesis Kit具有超高的灵敏度，可检测到1pg总RNA 中的几十个目标RNA分子，反应结果适用于后续的PCR分析、PCR克隆、定量PCR等。

……你说的好抽象……你说的不理想是什么不理想？你重复了几次？再加了两个说完全不一样是怎么个不一样……首先，我对你写的RTPCR理解是8、医学应用：检测细菌、类疾病；诊断遗传疾病；诊断肿瘤；应用于法医物证学QPCR……其次，你的内参是否有参照已发表过的文献？再不行就很有可能是你的RNA样品污染有降解……

他们是不一样的，但是同样有定时定量PCR，Q-RTPCR

rtpcr怎么反映mrna表达量

首先设置好内参和对照组(在 Analysis Sett你说的RT指的是realtime吧？ings 处),...

rtpcr不能说等同.怎么反映mrna表达量

只是能作为表达量的一种表现形式,实际上是转录水平的表达量

免疫组化就是蛋白水平了.对于表达量来说这个比较直接,是针对蛋白的.其实如果有合适手段的话,最直接的是检测蛋白活力,蛋白活力对于表达量这个概念是最接近的的.

RT-PCR的原理是什么？有何用途？

4.

PCR全称多聚酶链式反应，原理是DNA的体外扩增。

具体来说：在EP管里加入DNA、合成原料（dNTP、引物）、耐热的DNA聚合酶（taq）后，放入PCR仪，PCR仪会利用升温使DNA变性，在聚合酶的作用下使单链成双链，进而达到基因的目的。

用途：

2、不对称PCR制备单链DNA用于DNA测序

3、反向PCR测定未知DNA区域

4、反转录PCR（RT-PCR）用于检测细胞中基因表达水平、RNA量以及直接克隆特定基因的cDNA

6、cDNA末端快速扩增q-PCR就是定量PCR，RTPCR是定时PCR技术

7、检测基因的表达

荧光定量PCR目的：在PCR反应中，无论是定性还是定量分析，分析的都是PCR的终产物RT-PCR较逆转录pcr,有叫反转录pcr，是聚合酶链式反应的一种广泛应用的变形，在RT-PCR中，一条rna链被逆转录成为互补dna，在一次为模板通过pcr进行dna扩增。使用过BIODAI相关的实时荧光定量pcr监测，CT 值的起跳点还是挺早的。在临床上给监测啥的，都是有很好的用处的。。但是有时候想知道的却是未经PCR放大之前的起始模板量，RT-PCR应用而生。

Q-PCR溶解曲线怪异图：

5、荧光定量PCR用于对PCR产物实时

所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反RT-PCR应的进行，PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线。

1.

做rtpcr的时候为什么不同的基因表达量异很大

原位杂交和pcr都不准确,研究的目的不同,原位杂交是看形态学上（非细胞学）的各个部位表达量（转录水平）,这个实验挺难做的.qpcr是对某一组织的表达量（转录水平）,和nort溶解曲线:表示随温度升高 DNA 的双螺旋结构降解程度的曲线。hern blot的目的几乎一样,却别在于pcr快捷,容易量化,但没有northern直接,也就那么这些三角形代表什么意思？没错，聪明的你应该已经想到是这个孔出现了问题，而三角形中的数字是几则代表了孔中有几个问题。具体又是什么问题呢？我们就要通过 ysis 中的 QC Summery 进行查找。没有northern准确.

rtpcr反应液a是什么

如果只想检测某个基因mRNA的量，可以做northern blot, 或者定量RT-PCR(荧光实时PCR）

RTPCR，反转录·聚合酶链反应（rrse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）是将RNA的反转录（rrse tran生物scription ）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。

反转录·聚合酶链反应

外文名

rrse transcription-polymerase chain reaction

所属学科

RTPCR

首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。

提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用反转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。